Dans la ferme paternelle il apprend à monter à cheval et aussi à jouer de la guitare pour accompagner les messes dominicales de son père. A quinze ans il se produit en tournée dans l’Ouest pour des programmes publicitaires accompagné de sa guitare. Il sera très affecté par le décès de sa mère en 1932 son père se remarie la même année avec Ina Mae Spivey, une petite amie de lycée.

Après avoir obtenu son diplôme d'études secondaires en 1925, il travaille comme télégraphiste pour le chemin de fer reliant Saint-Louis à San Francisco et quand il avait le quart de nuit, il chantait et jouait de la guitare. C'est ainsi qu'en 1927 un des passagers en attente, l'acteur Will Rogers, lui fit remarquer qu'il avait une très belle voix et lui suggéra d'aller à Hollywood où il pourrait gagner de l'argent en chantant dans les films.. En 1928 fort de cette remarque Gene profite d’un repos pour ce rendre à New York et tente d’auditionner dans une maison de disques, mais en vain, du moins il gagne un précieux conseil de la société Victor Records se constituer une expérience radiophonique . Il trouve son bonheur avec la station de radio KVOO de Tulsa et petit à petit il se fait connaître sous le nom de « the Oklahoma yodeling cow-boy ». En 1929, riche d’une année de pratique sur les ondes , le voilà de retour à New York, bien décidé a s’imposer avec la chanson «That Silver Haired Daddy of Min» un morceau qu'il a co-écrit avec le compositeur Jimmy Long. Sa chanson connaît un réel succès, il obtient un contrat avec Colombia Record et un engagement de quatre ans dans une émission nationale de radio country de Chicago The National Barn Dance. Mis sur le marché le single sera vendu à plus d’un million d’exemplaires.

Installé aux Etats-Unis avec sa jeune épouse Ina, Gene Autry fait ses débuts au cinéma dans «In Old Santa Fe» (1934) avec Ken Maynard et George Hayes dans les rôles principaux. L’année suivante il campe un cow-boy chanteur qui dirige Radio Ranch, dans le western de science fiction en 13 épisodes «La reine de l’empire fantôme» de Otto Brouwer. Dès lors l’idée du cow-boy chanteur fait son chemin dans l’imagination des producteurs de la Republic Pictures, spécialiste des westerns de série B. En 1935 il est le premier acteur a inauguré l'ère des cow-boys chanteurs avec le western «Tumbling Tumbleweeds» de Joseph Kane où il chante et joue de la guitare avec Smiley Burnette à l'accordéon. Dès lors, flanqué de son cheval nommé Champion, et avec son acolyte comique Smiley Burnette, il personnifie le héros par excellence, un gars courageux, près à défendre les honnêtes gens et punir les hors-la-loi, le tout agrémenté de belles ballades romantiques au milieu des grandes plaines de l’Ouest dans plus de 90 films.

Lors de la Seconde Guerre mondiale, il s'est enrôlé dans l'armée américaine, affecté en tant qu'officier de vol de 1942 à 1946 au commandement du transport aérien, détenteur d'un brevet de pilote, il balada de gros avions cargo sur le théâtre de guerre, en Chine en Birmanie et en Inde, (pour la petite histoire sa notoriété était telle que les autorités l’ont exceptionnellement autorisé a porter ses bottes de cow-boy avec son uniforme). Mais avec son absence de trois ans sa place a été supplantée à la République par un autre cowboy chanteur Roy Rogers. Après son service militaire, il revient sur les plateaux avec la Columbia Pictures, et retrouve l’opportunité de chanter de nouvelles chansons dans chacun de ses westerns, qui bien souvent ses rôles de justicier qui se répétaient dans chaque film s'effacés au profit de ses chansons, néanmoins le public envahissait les salles obscur pour entendre ses ballades et découvrir un nouvel exploit du cow-boy chanteur , en sachant que chacun de ses films rapportaient en moyenne dix fois le coût de sa production.

À cette époque, Gene Autry avait créé sa propre société de production, « Flying AProductions », et agissait en tant que directeur exécutif, il produit dans les années 50 plusieurs séries télévisées comme «The Gene Autry Show», «The Adventures of Champion» de 1955/56 un western pour enfants et «Annie Oakley 1954/57 sur la vie romancée du célèbre tireur d'élite Annie Oakley incarnée par Gail Davis.

Homme d'affaires avisé, sa carrière se déroula durant une soixantaine d’années dans l'industrie du spectacle, lorsqu’en 1960 il prend sa retraite dans son Melody Ranch en Californie il était devenu multimillionnaire, il a dirigé un empire immobilier, incluant entre autres, dix stations de radio, une chaîne de télévision, une école aéronautique, une chaîne d’hôtels, une maison de disques, propriétaire d'une des meilleures leagues de baseball (les Angels de Los Angeles) et sans oublier le Autry Museum of Western Heritage inauguré en 1988. Un bande dessinée a été créée à partir de 1940 retraçant ses exploits de justicier aux service des plus faibles, et plus tard l'éditeur mexicain Editorial Novaro réédite 423 numéros de bandes dessinées de Gene Autry de 1954 à 1984.

Gene Autry a réalisé 640 enregistrements, dont plus de 300 chansons écrites ou co-écrites par lui. Ses disques se sont vendus à plus de 100 millions d'exemplaires, il possède plus d'une douzaine de disques d'or et de platine , et pour couronner le tout il est le seul artiste à être honoré de cinq étoiles au Hollywood Walk of Fame, pour chacune de ses catégories ; le cinéma , la chanson, télévision, la radio et le théatre.

Sa vie personnelle est restée très privée, il a été marié deux fois, avec Ina Mae Spivey en 1932, un amour de lycée et après le décès d’Ina en 1980, il épouse l’année suivante Jacqueline Ellam vice-présidente d’une banque californienne il resterons unis jusqu’au décès de l’acteur le 2 octobre 1998 à l’âge de 91 ans des suites d’une longue maladie. On ne lui connaît pas eu d'enfants.